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  微量DNA產(chǎn)物純化試劑盒說明書

MicroDNA Purification Kit

  目錄號(hào)：  YJ0520

 保   存：  室溫

 組分說明                                        

           

                                        Cat.No.                  YJ0520

                                        KitSize                     50

                                       BufferPB                   30ml

                                       BufferPS                   15ml

                              BufferPW（concentrate）               10ml

                                       BufferEB                   10ml

                                   SpinColumnDS                    50

                               CollectionTube（2ml）                 50

 產(chǎn)品簡介

     本試劑盒是專門針對(duì)微量PCR產(chǎn)物及一些酶反應(yīng)液（酶切，連接，探針標(biāo)記等）而設(shè)計(jì)的，利用硅基質(zhì)膜技術(shù)，以非常小的終洗脫體積（可少至10μl）,從反應(yīng)液中快速純化50bp-50kb的DNA片段，純化過程中可去除引物、寡核苷酸、酶等雜質(zhì)，可獲得高純度，高濃度，完整性好的DNA，回收率高達(dá)90%。本試劑盒回收的DNA可直接用于測序、連接和轉(zhuǎn)化、標(biāo)記、體外轉(zhuǎn)錄等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

 注意事項(xiàng)

 1.   本試劑盒適用于無選擇性地回收溶液中所有的DNA片段，如需選擇性回收特定片段，同時(shí)去除其他不同大小片段，請(qǐng)選擇我公司的膠回收試劑盒（YJ0524，YJ2302，YJ0518或YJ0526）。

 2.   *次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明先在 BufferPW 中加入無水乙醇。

 3.   使用前請(qǐng)檢查 BufferPB 是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀，如有結(jié)晶或者沉淀現(xiàn)象，可在 37℃水浴幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。

 4.   回收率與初始DNA量和洗脫體積有關(guān)。

 5.   所有離心步驟均為使用常規(guī)臺(tái)式離心機(jī)室溫下進(jìn)行離心。

 自備：無水乙醇，離心管  

操作步驟

1.    估計(jì)PCR反應(yīng)液或酶切反應(yīng)液的體積，加入5倍體積的Buffer PB，充分混勻（如PCR反應(yīng)體系為50μl，則加入250μlBufferPB，無需去除石蠟油或礦物油）。

      注意：在加入BufferPB后檢測溶液的pH值，若pH值大于7.5，可向其中加入10-30 μl 的3M醋酸鈉（pH5.0），從而將pH值調(diào)到5-7。

2.    柱平衡：向已裝入收集管（CollectionTube）中的吸附柱（SpinColumnDS）中加入200 μl Buffer PS，12,000rpm（~13,400×g）離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

3.    將步驟1中所得溶液加入到已裝入收集管的吸附柱中，室溫放置2分鐘，12,000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

      注意：吸附柱容積為700μl，若樣品體積大于700μl可分批加入。

4.    向吸附柱中加入650 μl Buffer PW（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

      注意：如果純化的DNA是用于鹽敏感的實(shí)驗(yàn)，例如平末端連接實(shí)驗(yàn)或直接測序，建議加入BufferPW后靜置2-5分鐘再離心。

5.    12,000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫?cái)?shù)分鐘，以*晾干。

      注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)（酶切、PCR等）。為確保下游實(shí)驗(yàn)不受殘留乙醇的影響，建議將吸附柱開蓋，置于室溫放置數(shù)分鐘，以*晾干吸附材料中殘余的乙醇。

6.   將吸附柱置于一個(gè)新離心管（自備）中，向吸附膜中間位置懸空滴加10-30 μl Buffer EB，室溫放置2分鐘。12,000rpm離心1分鐘，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。

      注意：1）洗脫液的pH值對(duì)于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液，應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)（可以用NaOH將水的pH值調(diào)到此范圍）。 

            2）為了提高DNA的回收量，可將離心得到的溶液重新加回吸附柱中，重復(fù)步驟6。

            3）洗脫體積不應(yīng)小于10μl，體積過少影響回收效率。

            4）如果使用TE洗脫，需要考慮其中含有的EDTA是否會(huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)。

            5）回收大于10kb的DNA片段時(shí)，BufferEB應(yīng)在50℃水浴中預(yù)熱，適當(dāng)延長吸附和洗脫時(shí)間，可增加回收效率。