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     Super-Bradford蛋白定量試劑盒說(shuō)明書(shū)

Super-BradfordProteinAssayKit                                                       

Super-Bradford 蛋白定量試劑盒說(shuō)明書(shū)



Cat.No. K0013                         

 

保存：2-8℃

組分說(shuō)明



Catalogno.                                 K0013

KitSize                                800 次/微孔，100 次/試管

BradfordProteinAssayReagent               200ml

BSA 標(biāo)準(zhǔn)液（2mg/ml）                          2ml



產(chǎn)品簡(jiǎn)介

    Bradford 法是簡(jiǎn)單和快速的比色蛋白定量方法。這一方法基于考馬斯亮藍(lán) G-250 與蛋白質(zhì)結(jié)合后，產(chǎn)生藍(lán)色化合物，反應(yīng)迅速而穩(wěn)定。反應(yīng)化合物在 465-595nm 處有大的光吸收值，化合物顏色的深淺與蛋白濃度的高低成正比關(guān)系，因此可通過(guò)檢測(cè) 595nm 的光吸收值的大小來(lái)計(jì)算蛋白的含量。本產(chǎn)品將傳統(tǒng)的 Bradford 方法進(jìn)行了改良，大限度的加大蛋白定量的線(xiàn)性范圍，變異性小于普通考馬斯亮藍(lán)染色法，靈敏度范圍為 100-1,500 μg/ml。使用本產(chǎn)品反應(yīng)迅速，顏色產(chǎn)物 1 小時(shí)內(nèi)保持穩(wěn)定。本試劑盒適用于多種緩沖液系統(tǒng)，不受金屬離子、還原劑和螯合劑的干擾。

注意事項(xiàng) 

 1.  如待測(cè)樣品中含較多的干擾物質(zhì)（具體見(jiàn)附表 1），可采用 BCA 蛋白定量試劑盒（K0014）或其他蛋白定量產(chǎn)品。

 2.  BSA 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液需與待測(cè)樣品的稀釋液一致（可用 1×PBS 或 0.9%生理鹽水進(jìn)行稀釋?zhuān)?

 3.  本試劑盒不適合含有去污劑的蛋白定量，所測(cè)蛋白分子量必須大于 3kD。

 4.  操作中請(qǐng)佩戴手套。

 5.  本產(chǎn)品僅限科研使用。



操作步驟（以大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)為例）

 1.  稀釋 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品：用與待測(cè)蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品。

 

                                                

管號(hào)    稀釋液用量（μl）   BSA標(biāo)準(zhǔn)品用量（μl）    BSA標(biāo)準(zhǔn)品終濃度（μg/ml）

                                                 

A                 0                 100                2,000

B                50                 150                1,500

 

C                200                200                1,000

 

D                200         200（從C管中?。?         500

E                200         200（從D管中取）          250

F                200         200（從E管中取）           125

G                200                 0                 0(空白)

 

 2.  試管檢測(cè)（檢測(cè)范圍：100-1500 μg/ml）

    1）按上表稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，將 30 μl 稀釋好的 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品分別加到作好標(biāo)記的試管中。 

    2）取干凈的試管，分別加入 30 μl 待測(cè)蛋白樣品(原液或稀釋液)，并作好標(biāo)記，推薦每個(gè)測(cè)定做 2-3 個(gè)平行反應(yīng)。

    3）向步驟 1）和步驟 2）的試管中各加入 1.5mlBradfordProteinAssayReagent，充分混勻，室溫放置 10 分鐘。

    4）用分光光度計(jì)測(cè)定 595nm 處的吸光值。

    5）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算樣品中的蛋白濃度。

        注意：數(shù)據(jù)處理時(shí)需要去除明顯錯(cuò)誤的值。未知樣品濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中查得, 實(shí)際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。如果是計(jì)算機(jī)繪制得曲線(xiàn)，可以從計(jì)算機(jī)給出的線(xiàn)性方程式計(jì)算出未知樣品的濃度。

    6）如果所得到的蛋白濃度不在檢測(cè)范圍內(nèi)，請(qǐng)重新稀釋樣品后再次測(cè)定。

 3.  微孔檢測(cè)（檢測(cè)范圍：100-1500 μg/ml）

    1）將按表 1 稀釋好的 A-GBSA 標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)蛋白樣品（原液或稀釋液）各 5 μl 分別加到作好標(biāo)記的 96 孔板微孔中。 

    2）每孔加入 250 μlBradfordProteinAssayReagent，充分混勻，蓋上 96 孔板蓋，室溫放置 10 分鐘。

    4）用酶標(biāo)儀測(cè)定 595nm 處的吸光值。

    5）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算樣品中的蛋白濃度。

        注意：數(shù)據(jù)處理時(shí)需要去除明顯錯(cuò)誤的值。未知樣品濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中查得, 實(shí)際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。如果是計(jì)算機(jī)繪制得曲線(xiàn)，可以從計(jì)算機(jī)給出的線(xiàn)性方程式計(jì)算出未知樣品的濃度。

    6）如果所得到的蛋白濃度不在檢測(cè)范圍內(nèi)，請(qǐng)重新稀釋樣品后再次測(cè)定。

  

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